Bilirrubina Total

Determinación cuantitativa de bilirrubina

06.02.20

Principio del método

La bilirrubina se convierte en azobilirrubina mediante el ácido sulfanílico diazotado midiéndose fotométricamente. De las dos fracciones presentes en suelo, bilirrubin-glucurónido y bilirrubina libre ligada a la albúmin, solo la primera reacciona en medio acuoso (bilirrubina directa) precisando la segunda la solunilización con dimetilsulfoóxido para que reaccione (bilirrubina indirecta). En la determinación de la bilirrubina indirecta se determina también la directa, correspondiendo el resultado de la bilirrubina total.

Significado clínico

La bilirrubina se origina por la degradación de la hemoglobina 

Es transportada del bazo al hígado y se excreta en la bilis

La hiperbilirrubinemia es el resultado de un incremento de la bilirrubinaen plasma. Causas más probables de la hiperbilirrubinemia.

Bilirrubina total: aumento de la hemólisis, alteraciones genéticas, anemia neonatal, alteraciones eritropoyéticas, presencia de drogas.

Bilirrubina directa: colestasis hepática alteraciones genéticas y alteraciones hepáticas.

Reactivos

• R1 - Ácidos
• R2- Sodio nitrito
• Calibrador Bilirubin

Preparación

 

Todos los reactivos están listos para su uso.

Conservación y estabilidad

Hasta la fecha de caducidad, conservar 2-8ºC protegidos de la luz

Material adicional

• Espectofotómetro
• Cubetas de 1 cm de paso de luz
• Equipamiento habitual de laboratorio.

Muestra

Suero y plasma libre de hemólisis.

Procedimiento:

1. Preparamos las condiciones de ensayo:

• Longitud de onda: 555 nm
• Cubeta: 1 cm paso de luz                                                                                  
• Temperatura: 15-25ºC

2. Ajustamos el espectofotómetro a 0 frente a agua destilada y pipeteamos en una cubeta:

3. Mezclar e incubar 5 min a 15-25ºC.

4. Leemos la absorbancia del patrón: 0.336 y la muestra: 0.291, frente al blanco de reactivo.

Cálculos

(0.291/0.336) x 1.17 = 1.013

El valor está entre la media.

Creatinina

Determinación cuantitativa de creatinina

30.01.20

Principio del método:

El ensayo de la creatinina esta basado en la reacción de la creatinina con el picrato de sodio descrito por Jaffé .

La creatinina reacciona con el picrato alcalino formando un complejo rojizo. El intervalo de tiempo escogido para las lecturas permite eliminar gran parte de las interferencias conocidas del método.

La intensidad de color formado es proporcional a la concentración de creatinina en la muestra ensayada.

Significado clínico:

La creatinina es el resultado de la degradación de la creatina, componente de los múculos y puede ser transformada en ATP, fuente de energía para las células.

La producción de creatina depende de la modificación de la masa muscular. Varía poco y los niveles suelen ser muy estables.

Se elimina a través del riñón. E n una insuficiencia renal progresiva hay una retención en sangre de urea, creatinina y ácido úrico.

Niveles altos de creatinina son indicativos de patología renal.

Reactivos

• R1- Ácido pícrico
• R2- Hidróxido sódico
• Calibrador de Creatinine.

Preparación 

Preparamos el reactivo de trabajo, mezclando volúmenes iguales de R1 Y R2.

 

Conservación y estabilidad

Hasta la fecha de caducidad, conservar 2-8ºC protegidos de la luz

Material adicional

• Espectofotómetro
• Cubetas de 1 cm de paso de luz
• Equipamiento habitual de laboratorio.

Muestra

Suero o plasma heparinizado.

Procedimiento:

1. Preparamos las condiciones de ensayo:

• Longitud de onda: 492 nm
• Cubeta: 1 cm paso de luz                                                                                  
• Temperatura: 37ºC/15-25ºC

2. Ajustamos el espectofotómetro a 0 frente a agua destilada y pipeteamos en una cubeta:

NOTA: La muestra se añade al lado del espectofotómetro ya que hay que medirla a los 30 segundos.

3. Mezclar y ponemos en marcha el cronómetro

4. Leemos la absorbancia al cabo de 30 segundos= 0.178 y al cabo de 90= 0.185 segundos de la adición de la muestra

Patrón a los 30"= 0.023

90"= 0.026

Cálculos

(0.185 - 0.178 /0.026 - 0.023) x 2 = 4.6

Un poco más alto que los valores de referencia.

HDL Colesterol D

Determinación cuantitativa de colesterol HDL 

29.01.20

Principio del método:

Determinación directa del HDLc ( colesterol de lipoproteínas de alta densidad) sin necesidad de pretratamiento o centrifugado de la muestra. 

La determinación se realiza en dos pasos:

1. Eliminación de lipoproteínas no-HDL
2. Medición de HDLc

La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de HDLc presente en la muestra ensayada.

Significado clínico

Las partículas de HDL son lipoproteínas de alta densidad que transporta el colesterol desde los tejidos del cuerpo hasta el hígado. Debido a que las HDL pueden retiral el colesterol de las arterias y transportarñlo de vuelta al hígado para su excreción, se les conoce como el colesterol o "lipoproteína buena", ya que niveles elevados esta relacionados con un menor riesgo cardiovascular.

Un nivel bajo de colesterol HDL es considerado uno de los principales factores de riesgo cardiovascular y enfermedades de las arterias coronarias.

Reactivos

• R1
• R2
• Calibrador HDLc/LDLc

Preparación 

Los reactivos ya vienen listos para su uso

HDLc/LDLc se recostituyen añadiendo 1ml de agua destilada.

Conservación y estabilidad

Los reactivos a 2-8ºC (4 semanas)

Calibrador 20-25ºC (30 horas) o 2-8ºC (2 semanas) o -20ºC (3 meses)

Material adicional

• Espectofotómetro
• Cubetas de 1 cm de paso de luz
• Equipamiento habitual de laboratorio.

Muestra

Suero y plasma heparinizado o EDTA.

Procedimiento:

1. Preparamos las condiciones de ensayo:

• Longitud de onda: 550-650 nm
• Cubeta: 1 cm paso de luz                                                                                  
• Temperatura: 37ºC/15-25ºC

2. Ajustamos el espectofotómetro a 0 frente a agua destilada y pipeteamos en una cubeta:

 
                                      

3. Mezclar e incubar 5 min a 37ºC.

4. Añadir 100 ul de R2 a cada tubo.

4. Leemos la absorbancia del patrón: -0.071

NOTA: Como obserbamos el resultado sale negativo debido a la poca cantidad de muestra ensayada, para poder encontrar resultados razonables, deberiamos echarle 600 ul de agua destilada.

Ácido úrico

Determinación cuantitativa del ácido úrico

23.01.20

Principio del método

El ácido úrico es oxidado por la uricasa a alantoina y peróxido de hidrógeno (2H2O2) que en presencia de peroxidasa, 4- aminofenazona y 2-4 diclorofenol sulfonato forma un compuesto rosáceo

Significado clínico

El ácido úrico y sus sales son el producto final del metabolismo de las purinas. En una insuficiencia renal progresiva hay una retención en sangre de urea, creatinina y ácido úrico.

Niveles altos del ácido urico son indicativos de patología renal y generalmente se asocia con la gota.

El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos del laboratorio.

Reactivos

• R1- Tampón 
• R2- Enzimas
• Calibrador de Uric Acid

Preparación

 

El grupo uno preparó el reactivo de trabajo (RT) vaciando las enzimas del R2 en el frasco de R1 tampón.

Conservación y estabilidad

Hata la fecha de caducidad, conservar 2-8ºC protegidos de la luz

Material adicional

• Espectofotómetro
• Cubetas de 1 cm de paso de luz
• Equipamiento habitual de laboratorio.

Muestra

Suero o plasma u orina.

Procedimiento:

1. Preparamos las condiciones de ensayo:

• Longitud de onda: 505 nm
• Cubeta: 1 cm paso de luz                                                                                  
• Temperatura: 37ºC/15-25ºC

2. Ajustamos el espectofotómetro a 0 frente a agua destilada

y pipeteamos en una cubeta:

3. Mezclar e incubar 10 min a 15-25ºC.

4. Leemos la absorbancia del patrón: 0.167 y la muestra: 0.168, frente al blanco de reactivo.

Cálculos

(0.168/0.167) x 6 = 6.035mg/dl

Dentro de los valores de referencia.

Colesterol

Determinación cuantitativa de colesterol

8.01.20

Principio del método:

El colesterol presente en la muestra origina un compuesto coloreado según la siguiente reacción:

Esteres colesterol + H2O ---> Colesterol + ácidos grasos

Colesterol + O2 ---> 4 - colesterona + H2O2

2H2O2 + Fenol + 4- aminofenazona ---> Quinonimina + 4 H2O

La intensidad de color formado es proporcional a la concentración de colesterol presente en la muestra ensayada.

Significado clínico

El colesterol es una sustancia grasa presente en todas las células del organismo. El híhgado produce naturalmente todo el colesterol que necesita para formar las membranas celulares y producir ciertas hormonas. La determinación del colesterol es una de las herramientas más importantes para el diagnóstico y clasificación de las lipemias. El aumento del nivel de colesterol es uno de los principales factores de riesgo cardiovascular.

El diagnóstico clínico debe relizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos de laboratorio.

Reactivos

• R1- Tampón 
• R2- Enzimas
• Calibrador de cholesterol.

Preparación 

El grupo uno preparó el reactivo de trabajo (RT) vaciando las enzimas del R2 en el frasco de R1 tampón.

Conservación y estabilidad

Hasta la fecha de caducidad, conservar 2-8ºC protegidos de la luz

Material adicional

• Espectofotómetro
• Cubetas de 1 cm de paso de luz
• Equipamiento habitual de laboratorio.

Muestra

Suero o plasma 

Procedimiento

1. Preparamos las condiciones de ensayo:

• Longitud de onda: 505 nm
• Cubeta: 1 cm paso de luz                                                                                  
• Temperatura: 37ºC/15-25ºC

2. Ajustamos el espectofotómetro a 0 frente a agua destilada
y pipeteamos en una cubeta:

 

3. Mezclar e incubar 5 min a 37ºC.

4. Leemos la absorbancia del patrón: 0.393 y la muestra: 0.351, frente al blanco de reactivo.

Cálculos

(0.351/0.393) x 200 = 178.63
Está dentro de los valores normales.