Colesterol

Determinación cuantitativa de colesterol

8.01.20

Principio del método:

El colesterol presente en la muestra origina un compuesto coloreado según la siguiente reacción:

Esteres colesterol + H2O ---> Colesterol + ácidos grasos

Colesterol + O2 ---> 4 - colesterona + H2O2

2H2O2 + Fenol + 4- aminofenazona ---> Quinonimina + 4 H2O

La intensidad de color formado es proporcional a la concentración de colesterol presente en la muestra ensayada.

Significado clínico

El colesterol es una sustancia grasa presente en todas las células del organismo. El híhgado produce naturalmente todo el colesterol que necesita para formar las membranas celulares y producir ciertas hormonas. La determinación del colesterol es una de las herramientas más importantes para el diagnóstico y clasificación de las lipemias. El aumento del nivel de colesterol es uno de los principales factores de riesgo cardiovascular.

El diagnóstico clínico debe relizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos de laboratorio.

Reactivos

• R1- Tampón 
• R2- Enzimas
• Calibrador de cholesterol.

Preparación 

El grupo uno preparó el reactivo de trabajo (RT) vaciando las enzimas del R2 en el frasco de R1 tampón.

Conservación y estabilidad

Hasta la fecha de caducidad, conservar 2-8ºC protegidos de la luz

Material adicional

• Espectofotómetro
• Cubetas de 1 cm de paso de luz
• Equipamiento habitual de laboratorio.

Muestra

Suero o plasma 

Procedimiento

1. Preparamos las condiciones de ensayo:

• Longitud de onda: 505 nm
• Cubeta: 1 cm paso de luz                                                                                  
• Temperatura: 37ºC/15-25ºC

2. Ajustamos el espectofotómetro a 0 frente a agua destilada
y pipeteamos en una cubeta:

 

3. Mezclar e incubar 5 min a 37ºC.

4. Leemos la absorbancia del patrón: 0.393 y la muestra: 0.351, frente al blanco de reactivo.

Cálculos

(0.351/0.393) x 200 = 178.63
Está dentro de los valores normales.