Triglicéridos

Práctica 14

Determinación cuantitaviva de triglicéridos

Principio del método

Los triglicéridos incubados con lipoproteínas (LPL), liberan glicerol y ácidos grasos libres. El glicerol es fosforilado por glicerolfosfato deshidrogenasa (GPO) y ATP rn presencia de glicerol quinasa (GK) para producir glicerol quinasa (GK) para producir glicerol-3-fosfato (G3P) y adenosina-5-difosfato (ADP). El G3P es entonces covertido a dehidroxicetona fosfato (DAP) y peróxido de hidrogeno (H2O2) por GPO.

Al final, el peróxido de hidrógeno reacciona con 4-aminotenazona (4AF) y p-clorofenol, reacción cataliada por la peroxidasa (POD) dando una coloración roja.
Intensidad del color formado es proporcional a la concentración de triglicéridos presentes en la mjuestra ensayada.

Significado clínico

Los triglicéridos son grasas que suministran energía a la célula.
Al igual que el coleserol, son transportados a las células del organismo por las lipoproteínas en la sangre.

Una diesta alta en grasas saturadas o carbohidratos puede elevar los niveles de triglicéridos.

Su aumento es relativamente inespecífico. Diversas dolencias, como ciertas difunciones hepáticas (cirrosis, hepatitis, obstrucción biliar) o diabetes mellitus, pueden estar asociadas a su elevación.

Reactivos

• R1- Tampón 
• R2- Enzimas
• Calibrador de Triglicéridos.

Preparación 

El grupo uno preparó el reactivo de trabajo (RT) vaciando las enzimas del R2 en el frasco de R1 tampón.

Conservación y estabilidad

Hata la fecha de caducidad, conservar 2-8ºC protegidos de la luz

Material adicional

• Espectofotómetro
• Cubetas de 1 cm de paso de luz
• Equipamiento habitual de laboratorio.

Muestra

Suero y plasma heparinizado o EDTA.

Procedimiento:

1. Preparamos las condiciones de ensayo:

• Longitud de onda: 505 nm
• Cubeta: 1 cm paso de luz                                                                                  
• Temperatura: 37ºC/15-25ºC

2. Ajustamos el espectofotómetro a 0 frente a agua destilada
y pipeteamos en una cubeta:

 

 

3. Mezclar e incubar 5 min a 37ºC.

4. Leemos la absorbancia del patrón: 0.288 y la muestra: 0.262, frente al blanco de reactivo.

Cálculos

(0.262/0.288) x 200 = 181.94
Un poco más alto que los valores de referencia.