Curva de calibración

PRACTICA Nº1 19/09/19

CONSTRUCCIÓN DE UNA CURVA DE CALIBRACIÓN Y MANEJO DEL ESPECTROFOTÓMETRO

OBJETIVOS:

Buscamos la longitud de onda adecuada para cada sustancia determinada.

UTILIDAD CLÍNICA.

Esta práctica se hizo con el fin de aprender el manejo del espectofotómetro y hacer curvas de calibración.

MATERIAL

• Erlenmeyer con cromógeno 1, de concentración 800mg/dl.
• Erlenmeyer con cromógeno 2, de concentración 600mg/dl.
• Agua destilada.
• Piperas manuales y automáticas para echar las cantidades que se piden adecuadamente.
• Tubos de ensayo, donde haremos las diluciones.
• Cubetas de espectrofotometría.
• Espectofotómetro de absorción, donde se va a medir la absorbancia.

PROCEDIMIENTO

Usamos dos tipos de colorante uno rojo y otro azul como analitos con capacidad cromógena para elaborar sendas baterías de dilución seriadas. También realizaremos sus respectivas medidas espectrofotométricas, sus correspondientes curvas de calibración y la concentración de las diversas disoluciones problema:

1. Elaboramos la batería de diluciones seriadas:
Una de ellas (azul) constará de 5 tubos con 4 ml cada uno y un factor de dilución 1/2.
La otra (roja) estará formada por 4 tubos con 3ml cada uno y un factor de dilución 1/3.

Batería azul: 
Primer tubo con 4ml de agua destilada + 4ml de colorante azul.
Los demás tubos tienen preparada 4 ml de agua destilada los cuales se le irá añadiendo 4ml del tubo anterior consecutivamente.

Batería roja:
Primer tubo con 3 ml colorante + 1.5 de agua destilada.
Los demás tubos tienen preparada 1.5 ml de agua destilada los cuales se le irá añadiendo 1.5ml del tubo anterior consecutivamente.


NOTA: El primer tubo de cada batería se construirá con el colorante correspondiente procedente del Erlenmeyer, sin diluir.

2. Elegimos las longitudes de onda correspondientes a cada cromógeno:
ROJO- 662mm
AZUL- 499mm

3. Medimos la absorbancia de cada un o de los tubos de ambas baterías y, con los datos obtenidos, elaborar las curvas de calibración:

Azul: 
1-1.017
2-0.556
3-0.259
4-0.131
5-0.065

Rojo:
1-2.660
2-0.918
3-0.332
4-0.126

4. A partir de tubos problema de concentración desconocida, calcular esta con ayuda de las curvas de calibración anteriores.
Rojo: 0.583
Azul:1.449