GLUCOSA-HK

PRACTICA 5 - DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE GLUCOSA IVD 23.10.19

SIGNIFIVADO CLÍNICO

La glucosa es la mayor fuente de energía para las células del organismo; la insulina facilita la entrada de glucosa en las células.

La diabetes mellitus es una enfermedad que cursa con una hiperglucemia, causada por un déficit de insulina.

El diagnóstico clínico debe hacerse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.

REACTIVOS

• R1 tampón
• R2 enzimas
• Glucose cal (calibrador primario de glucosa 100mg/dl)

PREPARACIÓN

Reactivo de trabajo (RT): Disolver el contenido de un vial de R2 

Enzimas en un frasco de R1 Tampón

Tapar el vial y mezclar suavemente hasta disolver su contenido.

MATERIAL ADICIONAL

• Espectofotómetro o analizador para lecturas de 340 nm
• Cubetas de 1.0 cm de paso de luz
• Equipamiento habitual de laboratorio: pipetas con sus respectivas puntas y cementerio.

MUESTRAS

• Suero o plasma libre de hemólisis
• Orina

Procedimiento:

1.Preparamos las condiciones de ensayo:

• Longitud de onda 340nm
• Cubeta de 1cm de paso de luz
• Temperatura 37ºC/15-25ºC

2.Ajustar el espectofotrómetro a cero frente a agua destilada

3.Pipetear en una cubeta:

4.Mezclar e incubar 5 min a 37ºC

5.Leer la absorbancia de calibrador y la muestra frente al blanco de reactivo.

Patrón- 0.308
Muestra-0.665

NOTA: cada fase se tiene que hacer inmediatamente para que el resultado no sea alterado.

MEDICIÓN DE GLUCOSA

PRÁCTICA 4 - MEDICIÓN DE GLUCOSA:

ORINA:

Separamos la orina, solo que a una le echamos proteínas:

SANGRE

Nos hicimos la prueba de glucosa con tiras reactivas, pinchándonos con las lancetas de laboratorio.

CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS

PRÁCTICA 3 - CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS EN ORINA CON ÁCIDO SULFOSALICÍLICO POR TURBIDIMETRÍA 16.10.19

FUNDAMENTO:

La adición de ácido sulfosalicílico a una solución de proteínas actúa sobre estas, dando lugar a la aparición de un fino precipitado en suspensión. Este precipitado se observa como una turbidez blanquecina cuya intensidad puede ser cuantificada por turbidimetría.

MATERIALES:

• Tubos de ensayo de 5ml y con capacidad para más de 10 ml
• Pipetas automáticas con capacidades de 200, 100, 50 y 25 ul
• Cubetas de fotometría y fotómetro

REAVTIVOS:

• Suero salino fisológico 0.9g/dl
• ácido sulfosalicídico al 3% (p/v) en agua destilada.
• Patrón de proteínas 7g/dl
• Albúmina bovina.

MUESTRA:

• Orina no centrifugada.

TÉCNICA:

1. Rotular un tubo de 5 ml como BR o blanco de reactivo, otro de 5ml como BM o blanco de muestra, cuatro más de 5ml como P1, P2, P3 y P4 y el útimo de 5ml como PB o problema.

2. Preparamos en los tubos de mayor tamaño las siguientes disoluciones (para toda la mesa)

D1-1/50 (0.2 ml de patrón + 9,8 ml de SSF)- 140mg/dl
D2- 1/100 (0.1ml de patrón +9.9 ml de SSF)-70 mg/dl
D3- 1/200 /0.5ml de patrón +9,95 ml deSSF)-35mg/dl
D4-1/400 (0.25ml de patrón + 9,975 ml de SSF)- 17,5 mg/dl

Nosotros lo realizamos con los 10ml de reactivo desechabamos la cantidad descrita anteriormente y añadiamos de proteínas esa misma cantidad.

3.Rellenar los tubos rotulados previamente de acuerdo con los datos (em ml) expresados en la tabla siguiente:

4.Agitar los tubos por inversión, transferir su contenido a las cubetas, seleccionar la longitud de onda a 660 nm y proceder como sigue:

-Ajustar a cero el fotómetro de el BR
-Medir la absorbancia de P1, P2, P3 y P4
-Ajustar el fotómetro con el BM.
-Medir la absorvancia del PB

P1: 0.964
P2:0.457
P3:0.146
P4:0.034
BM:0.000
PB:0.715

LECTURA DE RESULTADOS:

Concetración de la muestra: 18.92

GLUCOSA-TR

PRÁCTICA 2 -DETERMINACIÓN CUALITATIVA DE GLUCOSA.

OBJETIVO:

A través de la intensidad de color formado determinar la cantidad de glucosa presente en la muestra ensayada.

UTILIDAD CLÍNICA:

La glucosa es la mayor fuente de energía para las células del organismo; La insulina facilita la entrada de glucosa en las células.

La diabetes mellitus es una enferme que cursa con una hipoglucemia, causada por un déficit de insulina.

El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.

REACTIVOS:

• R1(Tampón) TRIS pH 7,4 (92 mmol/L) y fenol (0.3mmol/L)
• R2(Enzimas) Glucosa oxidasa (GOD) 15000U/l, peroxidasa (POD) y 4-aminofenazona (4-AF)(2.6 mmol/L)
• GLUCOSA CAL, patrón primario acuosso de Glucosa (100mg/dL)

PREPARACIÓN:

1. Reactivo de trabajo (RT) Disolver el contenido de un vial de R2 Enzimas en un frasco de R1 tampón.
2. Tapar y mezclar la muestra suavemente hasta disolver su contenido.

NOTA: Mantener todos los reactivos bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y evitar la contaminación durante su uso.

MATERIAL ADICIONAL:

• Espectrofotométro a 505 nm, para calcular la absorbancia de las muestras.
• Cubetas de 1.0 cm de paso de luz
• Equipamiento habitual de laboratorio: pipetas, punta de pipetas y cementerio

MUESTRAS:

• Suero o plasma, libre de hemólisis y LCR
• El suero debe separarse lo antes posible del coágulo.

NOTA: la glucosa en suero o plasma es estable 3 días a 2-8ºC

PROCEDIMIENTO:

1.Encender el espectofotrómetro, ajustalo a las condiciones anteriormente citadas y a cero frente a agua destilada.

2.Pipetear en una cubeta:

3.Mezclar e incubar 20 min  a temperatura ambiente

4.Leer la absorbancia del patrón y la muestra frente al blanco de reactivo.

Curva de calibración

PRACTICA Nº1 19/09/19

CONSTRUCCIÓN DE UNA CURVA DE CALIBRACIÓN Y MANEJO DEL ESPECTROFOTÓMETRO

OBJETIVOS:

Buscamos la longitud de onda adecuada para cada sustancia determinada.

UTILIDAD CLÍNICA.

Esta práctica se hizo con el fin de aprender el manejo del espectofotómetro y hacer curvas de calibración.

MATERIAL

• Erlenmeyer con cromógeno 1, de concentración 800mg/dl.
• Erlenmeyer con cromógeno 2, de concentración 600mg/dl.
• Agua destilada.
• Piperas manuales y automáticas para echar las cantidades que se piden adecuadamente.
• Tubos de ensayo, donde haremos las diluciones.
• Cubetas de espectrofotometría.
• Espectofotómetro de absorción, donde se va a medir la absorbancia.

PROCEDIMIENTO

Usamos dos tipos de colorante uno rojo y otro azul como analitos con capacidad cromógena para elaborar sendas baterías de dilución seriadas. También realizaremos sus respectivas medidas espectrofotométricas, sus correspondientes curvas de calibración y la concentración de las diversas disoluciones problema:

1. Elaboramos la batería de diluciones seriadas:
Una de ellas (azul) constará de 5 tubos con 4 ml cada uno y un factor de dilución 1/2.
La otra (roja) estará formada por 4 tubos con 3ml cada uno y un factor de dilución 1/3.

Batería azul: 
Primer tubo con 4ml de agua destilada + 4ml de colorante azul.
Los demás tubos tienen preparada 4 ml de agua destilada los cuales se le irá añadiendo 4ml del tubo anterior consecutivamente.

Batería roja:
Primer tubo con 3 ml colorante + 1.5 de agua destilada.
Los demás tubos tienen preparada 1.5 ml de agua destilada los cuales se le irá añadiendo 1.5ml del tubo anterior consecutivamente.


NOTA: El primer tubo de cada batería se construirá con el colorante correspondiente procedente del Erlenmeyer, sin diluir.

2. Elegimos las longitudes de onda correspondientes a cada cromógeno:
ROJO- 662mm
AZUL- 499mm

3. Medimos la absorbancia de cada un o de los tubos de ambas baterías y, con los datos obtenidos, elaborar las curvas de calibración:

Azul: 
1-1.017
2-0.556
3-0.259
4-0.131
5-0.065

Rojo:
1-2.660
2-0.918
3-0.332
4-0.126

4. A partir de tubos problema de concentración desconocida, calcular esta con ayuda de las curvas de calibración anteriores.
Rojo: 0.583
Azul:1.449