CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS

PRÁCTICA 3 - CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS EN ORINA CON ÁCIDO SULFOSALICÍLICO POR TURBIDIMETRÍA 16.10.19

FUNDAMENTO:

La adición de ácido sulfosalicílico a una solución de proteínas actúa sobre estas, dando lugar a la aparición de un fino precipitado en suspensión. Este precipitado se observa como una turbidez blanquecina cuya intensidad puede ser cuantificada por turbidimetría.

MATERIALES:

• Tubos de ensayo de 5ml y con capacidad para más de 10 ml
• Pipetas automáticas con capacidades de 200, 100, 50 y 25 ul
• Cubetas de fotometría y fotómetro

REAVTIVOS:

• Suero salino fisológico 0.9g/dl
• ácido sulfosalicídico al 3% (p/v) en agua destilada.
• Patrón de proteínas 7g/dl
• Albúmina bovina.

MUESTRA:

• Orina no centrifugada.

TÉCNICA:

1. Rotular un tubo de 5 ml como BR o blanco de reactivo, otro de 5ml como BM o blanco de muestra, cuatro más de 5ml como P1, P2, P3 y P4 y el útimo de 5ml como PB o problema.

2. Preparamos en los tubos de mayor tamaño las siguientes disoluciones (para toda la mesa)

D1-1/50 (0.2 ml de patrón + 9,8 ml de SSF)- 140mg/dl
D2- 1/100 (0.1ml de patrón +9.9 ml de SSF)-70 mg/dl
D3- 1/200 /0.5ml de patrón +9,95 ml deSSF)-35mg/dl
D4-1/400 (0.25ml de patrón + 9,975 ml de SSF)- 17,5 mg/dl

Nosotros lo realizamos con los 10ml de reactivo desechabamos la cantidad descrita anteriormente y añadiamos de proteínas esa misma cantidad.

3.Rellenar los tubos rotulados previamente de acuerdo con los datos (em ml) expresados en la tabla siguiente:

4.Agitar los tubos por inversión, transferir su contenido a las cubetas, seleccionar la longitud de onda a 660 nm y proceder como sigue:

-Ajustar a cero el fotómetro de el BR
-Medir la absorbancia de P1, P2, P3 y P4
-Ajustar el fotómetro con el BM.
-Medir la absorvancia del PB

P1: 0.964
P2:0.457
P3:0.146
P4:0.034
BM:0.000
PB:0.715

LECTURA DE RESULTADOS:

Concetración de la muestra: 18.92