Bilirrubina directa

DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE BILIRRUBINA

06.02.20

Principio del método

La bilirrubina se convierte en azobilirrubina mediante el ácido sulfanílico diazotado midiéndose fotométricamente. De las dos fracciones presentes en suelo, bilirrubin-glucurónido y bilirrubina libre ligada a la albúmin, solo la primera reacciona en medio acuoso (bilirrubina directa) precisando la segunda la solunilización con dimetilsulfoóxido para que reaccione (bilirrubina indirecta). En la determinación de la bilirrubina indirecta se determina también la directa, correspondiendo el resultado de la bilirrubina total.

Significado clínico

La bilirrubina se origina por la degradación de la hemoglobina 

Es transportada del bazo al hígado y se excreta en la bilis

La hiperbilirrubinemia es el resultado de un incremento de la bilirrubinaen plasma. Causas más probables de la hiperbilirrubinemia.

Bilirrubina total: aumento de la hemólisis, alteraciones genéticas, anemia neonatal, alteraciones eritropoyéticas, presencia de drogas.

Bilirrubina directa: colestasis hepática alteraciones genéticas y alteraciones hepáticas.

Reactivos

• R1- ácido sulfanílico y ácido clorídrico
• R2- sodio nitrito

Preparación

 

Todos los reactivos están listos para su uso.

Conservación y estabilidad

Hasta la fecha de caducidad, conservar 2-8ºC protegidos de la luz

Material adicional

• Espectofotómetro
• Cubetas de 1 cm de paso de luz
• Equipamiento habitual de laboratorio.

Muestra

Suero y plasma libre de hemólisis.

Procedimiento:

1. Preparamos las condiciones de ensayo:

• Longitud de onda: 555 nm
• Cubeta: 1 cm paso de luz                                                                                  
• Temperatura: 15-25ºC

2. Ajustamos el espectofotómetro a 0 frente a agua destilada y pipeteamos en una cubeta:

3. Mezclar e incubar 5 min a 15-25ºC.

4. Leemos la absorbancia del patrón: 0.146 y la muestra: 0.103, frente al blanco de reactivo.

Cálculos

(0.103/0.146) x 0.72 = 0.50

El valor está un poco más bajo de la media.