Cromatrografía.

PRACTICA 6 - SEPARACIÓN DE UNA MEZCLA DE AMINOÁCIDOS POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA. 24.10.19 

OBJETIVO:

Realizar una separación e identificación de los aminoácidos triptófano, alanina, valina y arginina presentes en una muestra meidante una cromatografía de capa fina ascendente.

MATERIAL:

• Láminas de gel de celulosa
• Disolvente de cromatografía
• Disolución reveladora: Resuspender nihindirnaen acetona a una concentración de 0.2% (p/v)

• Muestra problema conteniendo una mezca desconocida de aminoácidos.
• Muestra patrón de aminoácidos
• cubeta o tarro de cristal
• Micropipeta
• Atomizador

Procedimiento

1. Colocamos el disolvente en un vaso de precipitados de forma que cubra el fondo hasta una altura máxima de 1cm y cerrarla.

2. Coger una placa de gel de celulosa y con un lápiz muy blando, para no dañar el gel, marcar los límites de la placa (5 x 10cm)

Nota:para la placa usar guantes y coger por los bordes ya que la huella de los dedos podrían aparecer posteriormente como confusas manchas coloreadas.

3. Con el mismo lápiz marcar los puntos donde se aplicaran las muestras. A 1.5cm de la base y separados entre si 1cm. Con la placa en posición horizontal aplicamos 2ul de la muestra y patrones de aminoácidos apoyando suavemente la punta de la micropipeta sobre el punto señalado en la celulosa. Se aplica y se seca varias veces, para evitar una excesiva superficie del punto de aplicación.

4. Cuando las manchas se secan, introducimos la placa verticalemnte en la cubeta de forma que la muestra quede en la base de la cubeta y asegurandonos de que los puntos de aplicación se quedan por encima de del nivel de disolvente.Poner la tapa y dejar que el disolvente suba por capilaridad durante media hora o una hora.

5. Cuando el frente haya subido aproximadamente 8 cm sacar la placa del vaso, marcar con el lápiz el frente del disolvente y secar en estufa.

6. Con la placa perfectamente seca y en posición vertical, pulverizar con el revelador de nlnhidrina. La pulverización debe hacerse suave y uniforme.

7.Calentamos la placa 2 min a 105ºC  en una estufa.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

En cada patrón de aminoácidos obtendremos una mancha característica. En la mezcla problema, obtendremos tantas manchas como aminoácidos existan en ella. La posición de los patrones nos ayudará a identificar los aminoácidos de la muestra:

1. Arguinina-- Rf =0.3
2. Ácido glutamínico - Rf = 0.73
3. Fenilananina - Rf =0.86